简述重组DNA技术的基本步骤

1）获取目的基因 ） 目的基因：主要是编码蛋白质的结构基因（ ?目的基因：主要是编码蛋白质的结构基因（人类所 需要的） 需要的） 目的基因获取的方法： ?目的基因获取的方法： 直接获取法（ ①直接获取法（利用限制性内切酶从自然界已有的物 种中分离） 种中分离） 人工合成法（如通过mRNA逆转录获取、PCR等） 逆转录获取、 ②人工合成法（如通过 逆转录获取 等 分子??核心步骤 （ 　　2）体外重组 ）体外重组DNA分子 分子 核心步骤 同种限制性内切酶切割质粒，并用DNA连接酶将获 限制性内切酶切割质粒 连接酶将获 用同种限制性内切酶切割质粒，并用 连接酶 得的目的基因与质粒结合，构成重组质粒（ 得的目的基因与质粒结合，构成重组质粒 3）重组 ）重组DNA分子导入受体细胞 分子导入受体细胞 点 导入重组DNA分子常用的方法： DNA分子常用的方法 点 导入重组DNA分子常用的方法：若受体细胞为植物细 胞常用农杆菌转化法 农杆菌转化法； 拨 胞常用农杆菌转化法；受体细胞为动物的受精卵细胞 常采用显微注射法 显微注射法； 常采用显微注射法；受体细胞为微生物细胞常采用 离子处理法。 Ca2+离子处理法。 　4）筛选和鉴定 ） 真正导入目的基因的细胞很少， 真正导入目的基因的细胞很少，因此必须用 一定的方法筛选和鉴定出能够表达所需遗传性状 或所需产物的受体细胞