3、 目的基因克隆的基本方法有哪些? [ 10 分 ]

(1)直接从染色体DNA中分离:仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离,较少采用。(2)人工合成:根据已知多 肽链的氨基酸顺序,利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。(3)从 mRNA合成cDNA:采用一定的方法钓取特定基因的mRNA,再通过逆转录酶催化合成其互补DNA(cDNA),除去RNA链后, 再用DNA聚合酶合成其互补DNA链,从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。(4)利用PCR合成: 如已知目的基因两端的序列,则可采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术,在体外合成目的基因。(5)从基 因文库中筛选:首先建立基因组或cDNA文库,利用探针从文库中筛选目的克隆