5、简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法。

答： 　Sanger测序法的原理是采用核苷酸链终止剂——2，3-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3，5-磷酸二酯键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP，结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP，使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。 　方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。