4、 说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。
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答 纸层析是分配层析,利用分配系数不同,即氨基酸在两相中的溶解能力不同。离子交换层析利用氨基酸是两性物 质,在一定pH下不同氨基酸带电性质和带电量不同,因此交换能力不同。 纸层析步骤:滤纸准备、样品处理、点样、 平衡、展开、显色和定性定量分析。柱层析步骤:固定相准备、装柱、上柱、洗脱和收集、定性定量分析。 试述凝 胶层析原理,说明凝胶层析的应用并列出常用凝胶名称(10分)。 凝胶层析柱装有多孔凝胶,当含有各组分的混合液流 经凝胶层析柱时,各组分在层析柱内同时进行两种不同的运动。一种是随着溶液流动而进行的垂直向下的移动,另一 种是无定向的分子扩散运动。大分子物质由于分子直径大,不能进入凝胶微孔,只能分布于凝胶颗粒的间歇中以较快 速度流过凝胶柱。较小的分子能进入凝胶微孔,不断进出一个个颗粒的微孔内外,因此流动速度较慢,从而使混合溶 液中各组分按照相对分子量由大到小顺序先后流出层析柱得到分离。 应用:不同分子量蛋白质分离、蛋白质分子量 测定、蛋白质脱盐等。 常用凝胶:葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。